合成着色剂又称合成色素，主要是以苯、甲苯等化工产品为原料，经过磺化、偶合、缩合、偶氮化等一系列反应制成。中国食品添加剂使用卫生标准列入的合成色素主要有胭脂红、苋菜红、日落黄、赤藓红、柠檬黄、新红、靛蓝、亮蓝等等。与天然色素相比，合成色素颜色更加鲜艳，不易褪色，且价格较低，色调多样，故被广泛应用。但是长期大量使用将会对身体造成伤害，因此需要对合成着色剂的添加量进行检测。

　　合成着色剂少量食用可经肝肾代谢排出体外，但是若长期或一次性大量食用素含量超标的食品，可能会引起过敏、腹泻等症状。当摄入量过大，超过人体器官负荷时，会在体内蓄积，对肾脏、肝脏产生一定伤害。胭脂红等染色剂还会使人体的免疫力下降，并且增加癌症的发病率，因此饮品中的着色剂的使用必须控制在合适的范围，而对着色剂含量的检测也具有十分重要的意义。

　　本实验参考《GB 5009.35-2016食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》，采用我司新推出的聚酰胺固相萃取小柱对样品进行前处理，使用我司iChrom 5100液相色谱仪对着色剂标准品，线性以及加标回收率等进行检测方法验证，并且检测实际蔬菜汁中柠檬黄、胭脂红、日落黄的添加情况。

　　1.1设备与试剂

　　实验过程中其它玻璃器皿还包括棕色容量瓶(50mL、100mL)、移液枪(0——1000µL)、移液枪枪头(1mL、5mL)、一次性PVC手套、一次性口罩、50mL塑料离心管、10mL塑料离心管等若干。

　　1.2实验方法

　　【试剂及相关溶液配制】

　　0.02mol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵样品于1000mL水中充分溶解后，然后0.45µm滤膜过滤后备用。

　　混标储备液：准确称取柠檬黄、胭脂红、日落黄标准品各10mg，至50mL容量瓶中，用水溶解后定容即得200µg/mL的混标溶液。

　　标准混合工作液：移取不同体积的混标溶液，用流动相稀释，得到的浓度分别为100µg/mL、50µg/mL、40µg/mL、20µg/mL、10µg/mL、5µg/mL、1µg/mL。

　　【样品前处理】

　　样品提取

　　称取试样1.0 g(至0.001 g)于50 mL离心管中，加入6 mL 去离子水，涡旋30 s，超声振荡提取15 min，4000 r/min离心5 min，取上清液。剩余残渣再加入6 mL去离子水，重复操作一次。合并两次上清液。用20%柠檬酸溶液调节溶液pH=3——4，待上样。

　　SPE柱净化

　　(1)活化：净化前用5 mL甲醇、5 mL去离子水活化。

　　(2)上样和洗脱：将提取液以1 mL/min的速度过柱，弃去滤液，用5 mL淋洗液（甲醇：甲酸：水=4:2:4）淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，再用6 mL 10%氨化甲醇溶液洗脱并收集洗脱液。

　　(3)重新溶解：45℃缓慢氮吹至近干，加2 mL 混合流动相（A:B=1:1）溶解。涡旋混合1 min，用0.45 μm滤膜过滤后，待上机测试。

　　【色谱条件】

　　流动相：A：甲醇；B：0.02mol/L乙酸铵溶液

　　色谱柱：SinoChrom ODS-BP 5µm 4.6×250mm

　　流速：1.0mL/min

　　检测波长：254nm

　　进样体积：10μL

　　柱温：30℃

　　1.3实验结果

　　【典型分析谱图】

　　【线性相关】

　　分别移取不同体积的标准储备液，配制浓度分别为1µg/mL、5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL、40µg/mL、50µg/mL、100µg/mL的标准混合工作液。按浓度由低至高进样分析，以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，柠檬黄、胭脂红和日落黄的线性相关性结果如下。

　　【小检出限】

　　本系统的基线噪声为25µV，根据3倍信噪比，仪器的小检出限分别为柠檬黄20ng/mL，胭脂红25ng/mL，日落黄18ng/mL。根据前处理方法计算，各目标物的方法检出限分别为柠檬黄20µg/kg，胭脂红25µg/kg，日落黄18µg/kg，参见表7。

　　【加标回收率】

　　添加水平为4.0mg/kg的果蔬汁样品，经过处理后分析，得到的加标回收率见表8。

　　结论：

　　采用我司新推出的聚酰胺固相萃取小柱对样品进行前处理，利用iChrom 5100液相色谱仪，参考《GB 5009.35-2016食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》方法并对实验条件做进一步优化后，测得目标物线性关系优良，小检出限满足标准要求，加标回收率结果良好。

　　因此采用我司的iChrom5100液相色谱仪，利用该方法测试果蔬汁饮料中的合成着色剂含量时，仪器灵敏度高、定性和定量准确，良好的仪器精密度，能满足果蔬汁饮料中合成着色剂的含量测定。

　　参考文献：

　　[1] 《GB 5009.35-2016食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》

　　[2]  GB 2760-2014 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准

　　附录：